У типичној синтези ДНК, РНК и неприродних нуклеинских киселина, корак уклањања заштите и спајања игра кључну улогу.
Корак уклањања заштите је уклањање ДМТ групе на чврстој подлози или 5' хидроксилне групе на претходном нуклеозиду са органском киселином и излагање хидроксилне групе за следећи корак купловања.3% трихлорсирћетна киселина у дихлорометану или толуену се углавном користи за спровођење корака уклањања заштите.Концентрација трихлоросирћетне киселине и време депротекције (време деблокирања) доминирају чистоћом финалних производа.Ниска концентрација и недовољно време деблокирања оставља нереаговану ДМТ групу, која смањује принос и повећава нежељене нечистоће.Дуго време деблокирања може довести до стварања депурина синтетизованих секвенци, формирајући неочекиване нечистоће.
Корак спајања је осетљив на садржај воде у растварачу и влагу у ваздуху.Концентрација воде у синтези треба да буде мања од 40 ппм, боље мања од 25 ппм.Да би се одржала безводна синтеза, синтеза нуклеинских киселина треба да се одвија у окружењу ниске влажности, тако да препоручујемо нашим купцима да користеАмидитес растворена опрема, који може да раствори прашкасти или уљни фосфорамидит у анхидрованом ацетонитрилу да би се избегао контакт са ваздухом.
Пошто је растварање фосфорамидита боље у ситуацији без воде, а молекуларне замке да адсорбују воду у траговима у реагенсима и амидиту, потребно је припремитиМолецулар Трапс.Препоручујемо сито од 2 г за боце реагенса од 50-250 мл, 5 г за боце реагенса од 250-500 мл, 10 г за боце реагенса од 500-1000 мл и 20 г за боце реагенса од 1000-2000 мл.
Растварање фосфорамидита треба извршити у инертној атмосфери, а замена активаторских реагенса и ацетонитрила треба да се заврши на време.Реагенсе за затварање и оксидацију треба употребити што је пре могуће, отворени реагенси дају краћи рок трајања и мање активности током синтезе.
Време поста: 09.08.2022