Основни принцип синтезе ДНК

Хемијска синтеза ДНК заснива се на стратегији синтезе у чврстој фази и хемији фосфорамидита.За разлику од биолошке синтезе ДНК, материјал у хемијској синтези ДНК је ДМТ (4,4-диметокситритил) и фосфорамидитом модификовани деоксирибоксизид, као што је приказано на слици 1. Синтеза ДНК се врши на чврстој подлози (можемо понудити различитеКолона олиго синтезе), односно ЦПГ (стакло са контролисаним порама) и ПС (полистирен), а цела синтеза се врши наДНК/РНА синтетизатор, која је наша главна опрема, има различите моделе као што су: ХИ једноканални синтисајзер, ХИ-12, ХИ-192 итд, правац синтезе је од 3' до 5', а нуклеотид се уводи у чврсти носач преко једног циклус синтезе.Типичан циклус синтезе садржи четири корака, уклањање заштите, спајање, затварање и оксидацију (слика 2).Депротецтион је подешен да уклони ДМТ групу на чврстој подлози или 5' хидроксилну групу на претходном нуклеозиду, 3% трихлоросирћетна киселина у дихлорометану се користи као реагенс за уклањање заштите.Затим је фосфорамидитом модификованом деоксирибоксизиду остављено да изложи хидроксилну групу уз помоћ активатора, односно 5-етилтиотетразола или 4,5-дицијаноимидазола, формирајући фосфитетријестар (ИИИ), и реализован корак спајања.Корак затварања се спроводи да би се блокирала неизреагована хидроксилна група током корака купловања, да би се минимизирало формирање нежељених дефектних секвенци.Коначно, нестабилни фосфитетријестар (ИИИ) се оксидује у хемијски стабилан фосфортриестар (В) са јодом као оксидантом у присуству пиридина.

Синтетизована ДНК се може одвојити од чврстог носача аминолизом, 2-цијаноетил заштићена група на фосфортриестру и амид на нуклеобази се цепа у исто време, плоче за синтезу и колоне за синтезу у регалима се постављају директно у реакциону комору одОпрема за уклањање заштите.Сирова ДНК се може припремити помоћу ХПЛЦ-а, електрофорезе и ОПЦ на захтев, такође вам можемо обезбедитиОпрема за пречишћавањеза накнадну обраду.